蛋白 A/G 磁珠免疫沉淀（IP）实验 精选参考文献｜MCE

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蛋白 A/G 磁珠为 IP、Co-IP 和 ChIP 实验提供了一种快速便捷的方法。MCE 蛋白质 A/G 磁珠通常用于从血清、细胞培养上清或腹水中分离抗体，以及从细胞或组织提取物中免疫沉淀和共免疫沉淀抗原。Free Sample (200 μL）限时可申请试用。目录号：HY-K0202

1、乳腺癌中细胞质YAP 1介导的ESCRT-III组装促进自噬细胞死亡并被NEDD 4L泛素化
Cancer Commun (Lond). 2023 May;43(5):582-612.

用0. 5% PBS-Triton X-100洗涤蛋白A/G磁珠四次。然后加入抗体溶液，并将磁珠和抗体在翻转混合器上在25°C下孵育1小时。将抗体缀合的磁珠用0. 5% PBS-Triton X-100洗涤四次。然后加入制备的蛋白质上清液，并将与磁珠缀合的抗体和蛋白质在翻转混合器上于4°C温育2小时。用0.5% PBS‐Triton X‐100、1 × SDS‐P洗涤后

结果：YAP 1在乳腺癌细胞中主要表达于胞浆。胞质YAP 1促进乳腺癌细胞的自噬性死亡。细胞质YAP 1与ESCRT-III复合物亚基带电多泡体蛋白2 B（CHMP 2 B）和液泡蛋白分选4同源物B（VPS 4 B）结合，促进CHMP 2 B-VPS 4 B的组装并激活自噬体形成。EGCG将YAP 1保留在细胞质中，促进CHMP 2B-VPS 4 B的组装，从而促进乳腺癌细胞的自噬死亡。YAP 1与NEDD 4L结合，NEDD 4L介导YAP 1的泛素化和降解。乳腺组织微阵列显示，高水平的细胞质YAP 1有利于乳腺癌患者的生存。
结论：胞浆YAP 1通过促进ESCRT-III复合物的组装介导了乳腺癌细胞的自噬性死亡，并建立了基于胞浆YAP 1表达的乳腺癌生存预测模型。


2、联合放射和ATR抑制剂berzosertib激活STING信号传导并通过抑制结直肠癌中的SHP 1功能增强免疫治疗
Cancer Commun (Lond). 2023 Apr;43(4):435-454.

使用含有PMSF和磷酸酶抑制剂混合物的NP 40裂解缓冲液制备细胞裂解物。将抗SHP 1（1：100）或抗Flag（1：100）与蛋白A/G磁珠在4 ℃下预混合2 h。

不同治疗方案下SHP 1相互作用的STING和TRAF 6的共IP分析

结果：ATRi berzosertib和IR联合使用可增强具有不同微卫星状态的小鼠CRC模型中的CD 8+T细胞浸润，并增强抗PD-L1治疗的疗效。机制研究表明，IR + ATRi可以通过增加胞浆双链DNA水平来激活经典的cGAS-STING-pTBK 1/pIRF 3轴，并通过减弱SHP 1介导的对TRAF 6-STING-p65轴的抑制来激活非经典的STING信号传导，通过促进SHP 1的SUMO化在127位赖氨酸。通过增强STING信号传导，IR + ATRi诱导I型干扰素相关基因表达和强烈的先天免疫激活，并重振冷肿瘤微环境，从而促进免疫治疗。
结论：ATRi和IR的组合可以通过促进具有不同微卫星状态的CRC模型中的STING信号传导来促进抗PD-L1治疗。本研究所提出的新的组合策略在CRC的管理中值得探讨。


3、MAGE-C3通过诱导上皮-间质转化和免疫抑制促进食管鳞癌转移
Cancer Commun (Lond). 2021 Dec;41(12):1354-1372.

在有或没有IFN-γ的KYSE 30细胞中从毛地黄皂苷裂解物中免疫沉淀法师-C3和IFNGR 1。

结果如下： MAGE-C3在食管鳞癌组织中呈高表达。MAGE-C3的高表达与食管鳞癌患者的淋巴结转移风险和生存率相关。功能实验表明，MAGE-C3通过激活上皮间质转化（EMT）促进肿瘤转移。MAGE-C3抑制抗肿瘤免疫并调节T细胞的细胞因子分泌，这意味着免疫抑制功能。从机制上讲，MAGE-C3通过与IFN-γ受体1（IFNGR 1）结合并加强IFNGR 1与信号转导和转录激活因子1（STAT 1）之间的相互作用，促进IFN-γ信号传导并上调程序性细胞死亡配体1（PD-L1）。有趣的是，MAGE-C3在免疫活性小鼠中比在免疫缺陷裸鼠中显示出更高的肿瘤发生，证实了MAGE-C3的免疫抑制作用。此外，携带MAGE-C3过表达肿瘤的小鼠表现出更差的存活率和更多的肺转移，其中CD 8+浸润的T细胞减少，程序性细胞死亡1（PD-1）+CD 8+浸润的T细胞增加。
结论： MAGE-C3通过促进EMT和保护肿瘤免受免疫监视而增强肿瘤转移，可能成为潜在的预后标志物和治疗靶点。


4、生酮饮食通过赖氨酸β-羟丁酰化重塑癌症代谢
Nat Metab. 2024 Aug;6(8):1505-1528.

蛋白A/G磁珠（50 μL; 2 h）。免疫印迹显示来自喂食对照饮食或KD 5周的雄性小鼠的肝脏中ALDOB的Kbhb或Kac。用来自小鼠肝全细胞裂解物的泛Kbhb或泛Kac抗体进行免疫沉淀。

赖氨酸β-羟基丁酰化（Kbhb）是由生酮饮食（KD）诱导的翻译后修饰，KD是一种对多种人类疾病具有治疗作用的饮食。很少有人知道细胞过程是如何调节Kbhb。在这里，我们通过对小鼠肝脏的多组学分析表明，蛋白Kbhb受到KD的强烈影响。使用具有已知功能的小训练数据集，我们开发了一种用于预测功能重要的赖氨酸修饰位点（pFunK）的生物信息学方法，该方法揭示了各种蛋白质上功能相关的Kbhb位点，包括醛缩酶B（ALDOB）Lys 108。肝细胞癌细胞中KD消耗或β-羟基丁-酸补充增加ALDOB Lys 108 bhb并抑制ALDOB的酶活性。Kbhb模拟突变（p.Lys108Gln）减弱ALDOB活性及其与底物果糖-1，6-二磷酸的结合，抑制雷帕霉素信号传导和糖酵解的哺乳动物靶标，并显著抑制癌细胞增殖。我们的研究揭示了Kbhb在调节癌细胞代谢中的关键作用，并提供了一个普遍适用的算法来预测功能上重要的赖氨酸修饰位点。


5、去整合素和金属蛋白酶22通过其去整合素结构域激活整合素β1促进垂体腺瘤的进展
Neuro Oncol. 2024 Jan 5;26(1):137-152.

将上清液用与蛋白A/G磁珠预结合的抗体免疫沉淀。

GH 3和AtT 20细胞中ADAM 22和ITGB 1之间的Co-IP。

结果：ADAM 22在PA细胞中过表达，并能促进PA细胞的增殖、迁移和侵袭。ADAM 22与整合素β1（ITGB 1）相互作用，通过去整合素结构域激活FAK/PI 3 K和FAK/ERK信号通路，促进PA的进展。ADAM 22被PKA磷酸化并募集14-3-3，从而延迟其降解。ITGB 1靶向抑制剂（anti-itgb 1）与生长抑素类似物或多巴胺激动剂联合治疗PA具有抗肿瘤作用和协同作用。
结论：PA中ADAM 22表达上调，并通过激活ITGB 1信号通路促进PA增殖、迁移和侵袭。PKA可能通过转录后修饰水平调控ADAM 22的降解。ITGB 1可能是PA潜在的治疗靶点。


6、Cell Mol Immunol. 2023 Mar;20(3):292-304.

用IL-17 A（100 ng/ml）处理的HaCaT细胞中抗FXYD 3或TRAF 3抗体的蛋白免疫沉淀（IP）的免疫印迹分析。

7、Cell Res. 2025 Mar;35(3):165-185.

Raptin与下丘脑GT 1 -7神经元中GRM 3 VFT或GRM 3跨膜结构域（TMD）之间结合的免疫沉淀（IP）分析。将具有人GRM 3-VFT或人GRM 3-TMD过表达的下丘脑GT 1 -7神经元的细胞裂解物与PBS或His-Raptin孵育。

8、Cancer Commun (Lond). 2024 Dec;44(12):1391-1413.

蛋白A/G磁珠（4 h）。通过co-IP试验检测LMP 1-GFP和阿利克斯-MYC之间的相互作用。

9、Signal Transduct Target Ther. 2024 Sep 26;9(1):253.

蛋白A/G磁珠（30 μL）在4 ℃下与抗体和裂解缓冲液偶联。随后，将蛋白质样品与预缀合的珠在4 °C下在旋转轮上孵育过夜。

GRP 75、ANT 2和UCP 1的免疫共沉淀。用Myc-GRP 75、ANT 2和Flag-UCP 1共转染HEK 293 T细胞。用针对Myc-标签或Flag-标签的抗体免疫沉淀蛋白质提取物，然后用指定的抗体进行免疫印迹。

本文内容基于 MCE 的 蛋白A/G磁珠产品资料整理而成，欢迎查阅浏览（www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/protein-a/g-magnetic-beads.html）