【Western-Blotting】浅谈抗原制备

千姿百态

从《浅谈抗体的生产制备工艺》一贴中，我们知道传统方法和杂交瘤技术的应用两种方法制备的抗体均需免疫原（抗原）的刺激，诱导B细胞分化为成熟的浆细胞，分泌抗体；基因工程技术制备的抗体，亦依赖于特定抗原刺激相应抗体基因的克隆。由此可见，抗原对特异性抗体的产生具有至关重要的作用。此贴，简要谈谈抗原（免疫原）的制备。
从抗原来源分，抗原可大致分为：天然抗原、重组抗原、合成抗原和小分子抗原等。
1、天然抗原：一般采用物理和化学方法裂解组织或细胞，再从组织或细胞裂解液中提取、纯化天然抗原。此种方法获得的抗原容易保持蛋白（抗原）的构象和天然修饰（磷酸化、甲基化、糖基化等），但是纯化难度和成本相对较大。
2、重组抗原：基因工程技术使得研究者能轻易地克隆特定蛋白，并能批量化生产纯度较高地蛋白，而且能大量生产少见的天然抗原（比如基因突变导致的蛋白质中氨基酸改变），并能给特定蛋白添加标签（Flag、6×His、Myc等），然而重组抗原的构象和修饰不如天然抗原。
3、合成抗原：体外方法合成的抗原，多用于小分子蛋白质或多肽抗原的制备，一般用于上述2中方法难以获得的抗原。
不管是何种来源的抗原，抗原能够免疫B细胞产生抗体需满足以下几个条件：分子量足够大、外源性强、结构尽量复杂和可降解性好。与抗体特性密切相关的是抗原所具有的抗原决定簇：如抗原决定簇包含特定的蛋白修饰，则其免疫产生的抗体能用来检测特定修饰的蛋白；如果免疫抗原为免疫球蛋白（或免疫球蛋白特定多肽链），则抗体能结合所有的免疫球蛋白，二抗的制备即是原理。

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