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固定问题:福尔马林、4%PFA、OCT冰冻切片都试过了吗?比如phalloidin只能在冰冻切片上染出来。另外,固定方法可能影响蛋白结构,比如只有4%PFA固定的组织才能保留肌动蛋白的完整自然结构。
抗原修复:用的是高压锅吗?Acidic、Basic、Universal修复液都试过了吗?
一抗稀释浓度:1:50试过了吗?甚至1:20
设对照:阳性对照也染不出来说明抗体问题或者你实验技术问题,阴性对照和你标本的信号一样说明你的标本全是假信号。
记住:实验成功的关键是抗体,好用的抗体随便染染信号就出来了,不好用的抗体就得各种trouble shooting。
原文地址:https://zhuanlan.zhihu.com/p/721470010 |
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