生化诊断试剂的研制（一）

临床医师

体外诊断试剂从大类上分有生化诊断，免疫诊断，分子诊断，微生物诊断，血液细胞分析，血栓与止血诊断，临床流式细胞分析，免疫组化与荧光原位杂交，即时检测等，本篇我们首先介绍生化诊断试剂在自动生化分析仪上的检测。按照测定的靶标，反应原理和使用的原料，可以分为化学法，酶活性测定法，酶法，免疫比浊法和均相酶免疫法等五类，分别以此介绍。
目前在自动生化分析仪上应用常见的化学法诊断试剂项目主要包括：


1、总蛋白测定试剂
在碱性环境下，二价铜离子与蛋白质中的肽键反应生成紫红色的络合物，总蛋白含量与颜色的深浅成正比。通过与同样处理的标准蛋白比较，可以计算出血清中总蛋白的含量。
从测定原理来看，主要包含碱性试剂和二价铜离子两种试剂组成。碱性试剂可以使用NaOH，二价铜离子可以使用CuSO4，低浓度的NaOH，高浓度的CuSO4，空白吸光度较高，线性范围宽；高浓度的NaOH，低浓度的CuSO4，空白吸光度较低，线性范围窄。研制时需要设置合适的浓度，并且分开包装，此外Cu2+和NaOH容易形成沉淀，可以通过添加Cu2+保护剂酒石酸钾钠来阻止沉淀反应。
2、白蛋白测定试剂
在酸性环节中，血清白蛋白与指示剂溴甲酚绿BCG定量结合，形成蓝绿色复合物，白蛋白的含量与颜色的深浅成正比。
从测定原理看，BCG是一种酸碱指示剂，不同pH下颜色不同，所以在研制试剂时需要对pH进行控制，选择合适的缓冲体系，通常使用pH=4.2最优，琥珀酸缓冲液的线性最好，灵敏度较高。同时可以添加非离子表面活性剂来加强白蛋白与BCG的结合力。特异性方面可以通过选取30s内的吸光度数来减少非特异性反应。BCG不溶于酸需要先溶于碱性条件。
3、无机磷测定试剂
  在酸性条件下，血清中的无机磷与钼酸铵反应生成磷钼酸复合物，在340nm处检测吸光度，吸光度的变化同血清无机磷浓度成正比。
在检测过程中，易受样本中蛋白质及黄疸、溶血、乳糜血样本的干扰，可以通过添加非离子型表面活性剂，采用双波长或双试剂来降低干扰。
4、铜测定试剂
   在酸性条件下，铜蓝蛋白和清蛋白中的铜解离出来，抗坏血酸将解离出来的二价铜离子还原成一价铜离子，一价铜离子与显色剂生成蓝色络合物，通过检测蓝色铜络合物的吸光度计算出铜的浓度。
  在研发过程中关键的是选用合适的抗氧化剂，合适的解离剂和显色剂。
5、总胆红素测定试剂
  钒酸盐法测定总胆红素在pH=3附近，标本中的总胆红素被钒酸盐氧化成胆绿素。胆红素所呈的黄色减少，测定钒酸作用前后的吸光度差，与已知浓度标准液比较以求得标本中的胆红素总浓度。
  钒酸盐为剧毒产品，使用时应极其注意。

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