技术丨天然VS合成：封闭剂如何选？

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在体外诊断研究中，很多方法例如层析、化学发光都会用到封闭剂。BSA、酪蛋白等动物来源的封闭剂，或多或少存在各种问题，如含有其它的杂质（脂质、其它蛋白甚至病原体）、批间差难以控制、在一些临床样本中（尤其是幼儿、老人及患有自身免疫疾病的患者）存在与BSA特异反应的抗体从而导致假阳性等问题。
JSR利用其在高分子合成的经验，推出了三款特性、应用各异的全化学合成型封闭剂。今天我们就来对这三款封闭剂（共四个产品）的特性做一个梳理，希望能为您在封闭剂选择上提供新的思路。



Blockmaster™ CE210/CE510【明星产品】

CE210与CE510有相似的结构，均为末端连接了寡氨短链的PEG分子，区别在于CE210的分子量为2000，CE510的分子量为5000。
市面上以PEG为主体的封闭剂产品并不罕见，但JSR的CE封闭剂，亮点在于寡氨短链的设计上，如下图所示。



结构示意图

末端-NH₂，模拟蛋白质的氨基，用于与羧基或甲苯磺酰基（Tosyl）化学结合；两个-NH⁺，加入保存buffer中时，可以与磁珠或胶乳上偶联的蛋白质中带负电荷的部分发生静电吸附；一对非共轭电子对可以帮助CE分子与金颗粒结合。



提高磁珠分散性

CE系列封闭剂的结构决定了其在维持偶联物立体构象，提高偶联分子的稳定性，提高信噪比，提高胶体稳定性、改善凝集现象等方面，都有优异的表现。



改善偶联物构象

Blockmaster™DB1130

溶液中的胶体颗粒会发生聚集，疏水部分的吸附作用力是其中一个重要原因。基于这个思路设计的DB1130封闭剂，在大分子链中导入了最佳比例的亲水基团和疏水基团，疏水基团物理吸附在胶体颗粒的疏水部分，亲水基团可以提高整体的亲水性，从而起到防止聚集、防止免疫反应中非特异吸附的作用。


与BSA有相同程度的封闭效果



与BSA有相同程度的封闭效果

因为篇幅关系，这里只展示了少量在胶乳平台的评价数据，但是DB1130在磁珠化学发光平台上也有很好的表现。
应用上的新思路：

经EDC活化后的羧基微球中，加入少量DB1130后，再加入抗体，混合包被，有望提高抗体化学结合的比例。

Blockmaster™PA1080【多用途：封闭&稳定蛋白】

与DB1130结构相似，也是在大分子链中导入了亲水基团和疏水基团，但是分子量远大于DB1130。封闭微球时可能会过度封闭影响反应性，但是很适合用于微流控芯片、蛋白质储存容器、ELISA板以及细胞培养板的封闭。





侧向层析



侧向层析

在用于侧向层析的样本中添加PA1080后，检测到的信号比两组对照更强。推测是由于PA1080可以阻止蛋白吸附到载体上，可以更完全的迁移到检测线的位置。
细胞球形培养







与传统的单层培养相比，球形培养能够更好的重现细胞在体内的微环境，因而近年来备受关注。
实验表明，在同样的培养容器条件下，在使用Blockmaster™ PA1080处理后，可以有效地阻止细胞吸附到表面，有利于球形聚集体的形成。
稳定蛋白





在对PA1080进行各种评价的过程中，我们发现其对蛋白质有一定的稳定作用，于是特别设计了实验进行验证。上图是PSA胶乳比浊试剂的蛋白标准品溶液在37℃下震荡7天后的定标结果。
蛋白标准品、质控品是体外诊断试剂中很重要的组成部分，如何保证其中目标蛋白的活性一直是一个重要的课题。由于一些蛋白在液体状态不稳定，只能做成使用上有些不方便的冻干品。
在我们设计的实验中，PA1080对PSA抗原标准品起到了很好的保护作用。各位研发人员在筛选蛋白稳定剂时，不妨把PA1080列入选择的范围中。


JSR作为原料的生厂商，对于原料的验证会有一些局限性。希望这篇文章的说明，可以激发各位研发老师们进一步去拓展各封闭剂产品应用的兴趣。北京博尔迈是日本JSR集团旗下日本MBL公司在中国的全资子公司，请感兴趣的老师留言或拨打400-000-9858与我们联系！

产品名	包装规格	固体浓度	分散剂
CE510/CE210	100mL/1000mL	2%	水+0.01%Proclin 950
DB1130	100mL/1000mL	10%	水+0.005%Proclin 950
PA1080	100mL/1000mL	1%	水+0.01%Proclin 950

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